人用ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人白介素水平。用純化的人白介素抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白介素,再與HRP標(biāo)記的白介素抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。
人用ELISA試劑盒使用的具體注意事項(xiàng):
1、要注意避免出現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán),大鼠白介素23(IL23)檢測(cè)試劑盒其有類似過(guò)氧化物的活性,因此,在以HRP為標(biāo)記酶的ELISA測(cè)定中,如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過(guò)程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色。
2、樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,大鼠白介素23(IL23)檢測(cè)試劑盒一則細(xì)菌的生長(zhǎng),其所分泌的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作標(biāo)記的測(cè)定方法產(chǎn)生非特異性干擾。
3、血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作分離,大鼠白介素23(IL23)檢測(cè)試劑盒則可以在2~8℃下保存一周,如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存,應(yīng)在-70℃以下。
4、冰凍保存的血清標(biāo)本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融。標(biāo)本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用,從而引起假陰性結(jié)果。此外,凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)注意,不要進(jìn)行劇烈振蕩,反復(fù)顛倒混勻即可。
5、標(biāo)本在保存中如出現(xiàn)細(xì)菌污染所致的混濁或絮狀物時(shí),大鼠白介素23(IL23)檢測(cè)試劑盒應(yīng)離心沉淀后取上清檢測(cè)。